| A/U富集片段RNA结合蛋白的固相纯化与鉴定 |
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| 引用本文： | 孙达权,王莹,刘定干. A/U富集片段RNA结合蛋白的固相纯化与鉴定[J]. 生物化学与生物物理进展, 2013, 40(4): 386-391 |
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| 作者姓名： | 孙达权 王莹 刘定干 |
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| 作者单位： | 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所，分子生物学国家重点实验室，上海 200031,中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所，分子生物学国家重点实验室，上海 200031,中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所，分子生物学国家重点实验室，上海 200031 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(30970585，31170722)和分子生物学国家重点实验室开放课题组运行费资助项目 |
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| 摘 要： | RNA与细胞靶蛋白结合是RNA发挥其生物学功能的重要基础，因此，分离和鉴定RNA结合蛋白是研究RNA功能的必要步骤．目前，RNA结合蛋白的分离和鉴定方法较多，但各有优缺点．本实验利用可溶性碳二亚胺(EDC)介导的缩合反应，将A/U富集片段RNA共价偶联到固相介质amine M-270上，再用固定化RNA经亲和层析从细胞抽提物中分离纯化RNA结合蛋白，并以SDS-PAGE联合质谱分析和Western blotting等方法鉴定RNA特异性结合蛋白．最后通过荧光原位杂交和共聚焦显微镜证明这些RNA特异性结合蛋白确与RNA在细胞内结合．实践证明这一方法简单、高效、易于掌握．
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| 关 键 词： | C/EBPβ 3′UTR，A/U富集RNA，hnRNPC，核酸-蛋白质相互作用 |
| 收稿时间： | 2012-06-21 |
| 修稿时间： | 2012-10-09 |
Purification and Analysis of A/U-rich RNA Binding Protein Using Immobilized RNA by EDC Crosslinking |
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| SUN Da-Quan,WANG Ying and LIU Ding-Gan. Purification and Analysis of A/U-rich RNA Binding Protein Using Immobilized RNA by EDC Crosslinking[J]. Progress In Biochemistry and Biophysics, 2013, 40(4): 386-391 |
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| Authors: | SUN Da-Quan WANG Ying LIU Ding-Gan |
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| Affiliation: | State Key Laboratory of Molecular Biology, Institute of Biochemistry and Cell Biology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200031, China,State Key Laboratory of Molecular Biology, Institute of Biochemistry and Cell Biology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200031, China and State Key Laboratory of Molecular Biology, Institute of Biochemistry and Cell Biology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200031, China |
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| Abstract: | |
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