| 持续性内切酶EG5C-1的改造及酶学性质 |
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| 引用本文： | 吕科旻,周雨朦,吴斌,何冰芳.持续性内切酶EG5C-1的改造及酶学性质[J].生物加工过程,2022(5):500-506. |
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| 作者姓名： | 吕科旻 周雨朦 吴斌 何冰芳 |
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| 作者单位： | 1. 南京工业大学生物与制药工程学院;2. 南京正大天晴制药有限公司;3. 南京工业大学药学院 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划(2018YFA0902200)；;国家自然科学基金(21776135、81573338)；;江苏省基础研究计划(BE2018395)； |
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| 摘 要： | 为了提高glycosyl hydrolase 5 (GH5)家族的持续性内切酶EG5C-1的催化活性，对EG5C-1进行同源建模和分子对接，分析确定了活性架构区域内的23个关键氨基酸残基，并通过丙氨酸扫描、饱和突变和组合突变等方法最终获得催化活性显著提高的突变体D70Q/S235W,并分析其酶学性质。结果表明：D70Q/S235W的最适反应温度为60℃,最适pH为6.0。以羧甲基纤维素钠(CMC)和微晶纤维素(Avicel)为底物进行水解产物分析，突变体D70Q/S235W的主要水解产物为纤维二糖和纤维三糖。本研究筛选获得催化活性和酶学性质显著提高的突变体，可为纤维素酶的蛋白质工程改造奠定基础。
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| 关 键 词： | 持续性内切酶 活性架构 蛋白质工程 酶学性质 纤维素酶 |
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