| 莱芜猪肝脏组织全长cDNA文库的构建和鉴定 |
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| 引用本文： | 闫顺,李付美,曲志才,徐来祥.莱芜猪肝脏组织全长cDNA文库的构建和鉴定[J].生物技术通讯,2010,21(3):397-400. |
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| 作者姓名： | 闫顺 李付美 曲志才 徐来祥 |
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| 作者单位： | 曲阜师范大学,生命科学学院,山东,曲阜,273165 |
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| 基金项目： | 国家科技基础条件平台建设项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建莱芜猪肝脏组织全长cDNA文库,以便研究与莱芜猪优良性状相关的基因。方法:采用改良的异硫氰酸酸胍一步法制备总RNA;利用SMART技术,以PrimeScript反转录酶逆转录合成第一链cDNA,通过LD-PCR扩增获得cDNA双链;经蛋白酶K消化和CHROMA SPIN-400柱分级分离后,收集500 bp以上的cDNA片段,并与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,建成原始文库;随机挑取单菌落,用HindⅢ和EcoRⅠ进行双酶切鉴定重组子插入片段大小。结果:经鉴定,原始文库的滴度为2.8×105 cfu/mL,重组率约为98%,插入片段大小为0.5～2 kb,平均插入片段长度大于1 kb。结论:建立的cDNA文库质量良好,可以用于目的基因的筛选。
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| 关 键 词： | 莱芜猪 肝脏 cDNA文库 SMART技术 |
Construction and Identification of a Full-Length cDNA Library from Laiwu Pig Liver Tissue |
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| YAN Shun,LI Fu-Mei,QU Zhi-Cai,XU Lai-Xiang.Construction and Identification of a Full-Length cDNA Library from Laiwu Pig Liver Tissue[J].Letters in Biotechnology,2010,21(3):397-400. |
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| Authors: | YAN Shun LI Fu-Mei QU Zhi-Cai XU Lai-Xiang |
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| Institution: | College of Life Science,Qufu Normal University,Qufu 273165,China |
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