| 趋化因子受体CXCR4b在大肠杆菌中的高效表达、增溶及纯化 |
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| 引用本文： | 孙海翔,葛保胜,许耀. 趋化因子受体CXCR4b在大肠杆菌中的高效表达、增溶及纯化[J]. 微生物学通报, 2010, 37(5): 0651-0657 |
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| 作者姓名： | 孙海翔 葛保胜 许耀 |
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| 作者单位： | 1. 中国石油大学(华东)化学化工学院,山东青岛,266555
2. 中国石油大学(华东)生物工程与技术中心,山东青岛,266555 |
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| 基金项目： | 中国石油大学(华东)博士基金项目(No. Y060418) |
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| 摘 要： | 膜蛋白在细胞分化、信号转导等生理活动中发挥着重要作用,然而膜蛋白结构与功能的研究却受到高质量蛋白制备的严重制约。将斑马鱼趋化因子受体CXCR4b基因克隆到pMAL-p4x表达载体中,在大肠杆菌TB1中表达麦芽糖结合蛋白(MBP)-CXCR4b融合蛋白。通过系统优化其发酵表达条件,实现了CXCR4b的过量表达。最佳表达条件为:宿主菌选用大肠杆菌TB1,TB培养基,诱导剂IPTG浓度为0.5mmol/L,诱导时机为对数中后期。通过对10种不同表面活性剂的筛选,发现DM、FC-14和Brij35等表面活性剂对CXCR4b有较好的增溶效果。利用Ni2+亲和色谱和S200凝胶色谱两步纯化,得到CXCR4b的纯度可达90%以上。圆二色谱检测显示纯化的CXCR4b呈典型的α螺旋结构。
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| 关 键 词： | G蛋白偶联受体 趋化因子受体CXCR4b 表达优化 纯化 表面活性剂 |
High-level Expression, Solubilization and Purification of Chemokine Receptor CXCR4b in Escherichia coli |
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| SUN Hai-Xiang,GE Bao-Sheng and XU Yao. High-level Expression, Solubilization and Purification of Chemokine Receptor CXCR4b in Escherichia coli[J]. Microbiology China, 2010, 37(5): 0651-0657 |
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| Authors: | SUN Hai-Xiang GE Bao-Sheng XU Yao |
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| Affiliation: | 1. College of Chemistry and Chemical Engineering, China University of Petroleum, Qingdao, Shandong 266555, China;2. Center for Bioengineering and Biotechnology, China University of Petroleum, Qingdao, Shandong 266555, China;1. College of Chemistry and Chemical Engineering, China University of Petroleum, Qingdao, Shandong 266555, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | G protein coupled receptor chemokine receptor CXCR4b expression optimization purification surfactant |
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