| 普通生酮基古龙酸菌中山梨糖脱氢酶和山梨酮脱氢酶的纯化及酶学性质分析 |
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| 引用本文： | 高媛,曾伟主,周景文,陈坚. 普通生酮基古龙酸菌中山梨糖脱氢酶和山梨酮脱氢酶的纯化及酶学性质分析[J]. 微生物学报, 2017, 57(10): 1546-1554 |
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| 作者姓名： | 高媛 曾伟主 周景文 陈坚 |
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| 作者单位： | 工业生物技术教育部重点实验室, 江南大学生物工程学院, 江苏 无锡 214122,工业生物技术教育部重点实验室, 江南大学生物工程学院, 江苏 无锡 214122,工业生物技术教育部重点实验室, 江南大学生物工程学院, 江苏 无锡 214122,工业生物技术教育部重点实验室, 江南大学生物工程学院, 江苏 无锡 214122 |
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| 基金项目： | 国家"973项目"（2014CB745100）;全国博士学位论文作者专项资金（201256）;国家自然科学基金（21390204）;江苏省科技支撑计划（BE2014698） |
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| 摘 要： | 【目的】对源于普通生酮基古龙酸菌(Ketogulonicigenium vulgare WSH-001)的山梨糖脱氢酶(Sorbose dehydrogenase,SDH)和山梨酮脱氢酶(Sorbosone dehydrogenase,SNDH)的酶学性质进行分析。【方法】以K.vulgare WSH-001基因组DNA为模板,PCR扩增得到山梨糖脱氢酶基因(sdh)和山梨酮脱氢酶基因(sndh),构建重组表达质粒p ET28a-sdh、p ET28a-sndh,并分别转入大肠杆菌BL21(DE3)中。利用镍柱亲和层析和凝胶过滤层析得到纯化的SDH和SNDH。【结果】成功构建产SDH和SNDH的大肠杆菌BL21(DE3)并对目的酶进行纯化。SDS-PAGE分析结果表明,SDH和SNDH的大小分别为64 k Da和48 k Da,与理论预测值一致。显色法测得SDH酶活为3.15 U/mg,最适反应温度为30°C,最适反应pH为8.0左右;SNDH酶活为6.12 U/mg,最适反应温度为35°C,最适反应pH为8.0左右。在pH 3.0、4.0、5.0的偏酸性条件下,2个酶的酶活受到显著影响。【结论】表达并纯化了来源于普通生酮基古龙酸菌来源的SDH、SNDH,并进行了酶学性质分析,为利用SDH、SNDH实现维生素C前体2-酮基-L-古龙酸的一步法发酵生产提供了必要的参考。
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| 关 键 词： | 氧化葡萄糖酸杆菌 2-酮基-L-古龙酸 山梨糖脱氢酶 山梨酮脱氢酶 |
| 收稿时间： | 2016-11-25 |
| 修稿时间： | 2017-02-09 |
Purification and characterization of L-sorbose dehydrogenase and L-sorbosone dehydrogenase from Ketogulonicigenium vulgare WSH-001 |
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| Yuan Gao,Weizhu Zeng,Jingwen Zhou and Jian Chen. Purification and characterization of L-sorbose dehydrogenase and L-sorbosone dehydrogenase from Ketogulonicigenium vulgare WSH-001[J]. Acta microbiologica Sinica, 2017, 57(10): 1546-1554 |
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| Authors: | Yuan Gao Weizhu Zeng Jingwen Zhou Jian Chen |
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| Affiliation: | Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education;School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu Province, China,Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education;School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu Province, China,Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education;School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu Province, China and Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education;School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu Province, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Gluconobacter oxydans 2-keto-L-gulonic acid L-sorbose dehydrogenase L-sorbosone dehydrogenase |
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