α-葡萄糖苷酶基因序列分析及真核表达载体构建 |
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作者姓名: | 王继瑞 张云开 覃晓娟 李玮 梁智群 |
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作者单位: | 广西大学生命科学与技术学院,广西,南宁,530004 |
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摘 要: | 目的:Aspergillus niger(CU-1)菌株α-葡萄糖苷酶基因(agdA)克隆并对其序列进行分析,构建该基因的真核表达载体。方法:设计合成的一对特异性引物,采用PCR以总DNA为模板,扩增得到DNA片段(D1);采用RT-PCR方法扩增得到DNA片段(D2)。将DNA片段D1和D2转入大肠杆菌中并进行了序列测定,序列进行BLAST比对分析。将α-葡萄糖苷酶基因的cDNA片段与表达载体pGAPZαA连接,构建重组表达载体。结果:基因agdA大小为3 127bp,含有3个外显子和4个内含子。该基因的cDNA序列大小为2 958bp,包含完整的编码框,编码985个氨基酸。agdA基因序列与已发表的α-葡萄糖苷基因序列同源性达99%,其中有6个位置的碱基发生了变化。已成功构建重组表达载体pGAPZαA-agdA。结论:Aspergillus niger(CU-1)菌株α-葡萄糖苷酶基因序列分析及重组表达载体pGAPZαA-agdA的构建为在毕赤酵母中表达Aspergillus niger(CU-1)菌株的α-葡萄糖苷酶奠定基础。
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关 键 词: | Aspergillusniger(CU-1) α-葡萄糖苷酶基因 基因序列分析 真核表达 |
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