新疆贝母属药用贝母ISSR-PCR体系的确立和优化

目的:建立适合新疆贝母属植物总DNA的ISSR-PCR优化反应体系,为新疆贝母属8种药用贝母品种鉴定和遗传多样性研究提供依据。方法:综合利用单因素实验和L16(45)正交试验,对因素Taq DNA聚合酶、d NTPs、Mg2+、引物浓度、模板DNA含量进行优化,并考察循环次数、延长时间及退火温度。结果:每个因素的不同水平对PCR反应有显著影响,其中Mg2+影响最大。新疆贝母属植物总DNA的ISSR-PCR最适体系为50μL:5μL 10×Buffer、2.5 mmol/L Mg2+、0.30 mmol/L d NTPs、0.8μmol/L引物、0.75 U Taq酶、1.0 ng/μL模板DNA、33.35μL dd H2O。循环次数为45 cycle,延伸时间10 min,引物UBC853的最适退火温度为49.8℃。结论:建立的新疆贝母属植物总DNA的ISSR-PCR反应体系经23份新疆贝母属8种药用贝母样品检验,ISSR-PCR扩增效果显著,证明该体系具有较高的稳定性和可重现性,为新疆贝母属8种药用贝母遗传多样性的分子标记研究奠定基础。