| 表达猪圆环病毒2型ORF2基因的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 张挺杰,刘星,孙涛,朱雪蛟,范宝超,白娟,姜平.表达猪圆环病毒2型ORF2基因的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建与鉴定[J].病毒学报,2015,31(1):65-73. |
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| 作者姓名： | 张挺杰 刘星 孙涛 朱雪蛟 范宝超 白娟 姜平 |
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| 作者单位： | 南京农业大学农业部动物细菌学重点实验室,南京,210095;南京农业大学农业部动物细菌学重点实验室,南京,210095;南京农业大学农业部动物细菌学重点实验室,南京,210095;南京农业大学农业部动物细菌学重点实验室,南京,210095;南京农业大学农业部动物细菌学重点实验室,南京,210095;南京农业大学农业部动物细菌学重点实验室,南京,210095;南京农业大学农业部动物细菌学重点实验室,南京,210095 |
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| 基金项目： | 教育部科技项目(313031;20120097110043);农业部行业专项子项目(201203039);国家生猪产业技术体系专项(CARS-36);国家自然基金(31230071) |
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| 摘 要： | 猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是目前危害世界养猪业的两种重要病原。本研究采用PCR方法构建PRRSV疫苗株TJM-F92全长cDNA克隆载体pCMV-TJM,并在其ORF7和3′UTR之间插入AflⅡ/MluⅠ酶切位点和转录调控序列TRS6,构建获得pCMV-TJM-TRS表达载体。将PCV2ORF2基因插入该载体AflⅡ/MluⅠ位点,获得重组质粒pCMV-TJM-Cap。将pCMV-TJM、pCMV-TJM-TRS和pCMV-TJM-Cap分别转染Marc-145细胞,拯救获得3种重组病毒rTJM、rTJM/TRS和rTJM/Cap。基因测序列、酶切鉴定、Western blot、间接免疫荧光和病毒生长特性结果显示,3种重组PRRSV病毒都含有特征性分子标记,在Marc-145细胞增殖特性与亲本病毒相似;rTJM/Cap传至第8代,仍含有外源Cap基因,病毒感染细胞能有效表达PCV2Cap蛋白,从而为PRRSV致病机制和PRRSV-PCV2疫苗研究奠定了重要基础。
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| 关 键 词： | 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪圆环病毒2型 反向遗传 重组病毒 |
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