地中海拟无枝菌酸菌U32中amrC/amkC基因的序列分析及在大肠杆菌中的表达

从力复霉素SV产生菌——地中海拟无枝菌酸菌(Amycolatopsis mediterranei)U32的硝酸盐同化基因簇的上游克隆了一个2.6kb的Eco-RI—XhoI DNA片段并测定其序列。序列分析表明，该DNA片段编码两个完整的开放阅读框架(ORF)，ORF2的起始密码子GTG与ORF1的终止密码子TGA在TG处重叠。ORF1编码一个含224个氨基酸的多肽，它同放线菌中典型的应答调节蛋白包括AfsQ1和MtrA有很高的同源性；ORF2编码一个含472个氨基酸的蛋白，它同包括AfsQ2和MtrB在内的组氨酸激酶同源。ORF1和ORF2有可能构成典型的双组份信号传导系统，分别命名为amrC和amkC。在T7启动子的控制下，完整的amrC和去除子N端一个可能的跨膜区的amkC在大肠杆菌中分别得到了高效表达，表达蛋白的分子量分别为30kD和46kD，与推测蛋白的分子量一致。