前肽缺失体vWF改善FⅧ基因断裂转移细胞的重链和活性分泌 |
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引用本文: | 朱甫祥,刘泽隆,缪静,屈慧鸽,迟晓艳.前肽缺失体vWF改善FⅧ基因断裂转移细胞的重链和活性分泌[J].中国生物工程杂志,2012,32(7). |
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作者姓名: | 朱甫祥 刘泽隆 缪静 屈慧鸽 迟晓艳 |
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作者单位: | 鲁东大学生命科学学院 烟台264025 |
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基金项目: | 山东省自然科学基金,教育部留学回国人员科研启动基金 |
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摘 要: | 通过转von Willebrand因子(vWF)的前肽缺失突变体(vWF-△Pro)基因,探讨了vWF-△Pro对双载体转凝血Ⅷ因子(FⅧ)基因的影响.将vWF-△Pro基因和B-区缺失型FⅧ( BDD-FⅧ)的重、轻链基因共转染HEK293细胞48 h后,ELISA检测重链的分泌量为(142±29) ng/ml,明显高于未转vWF-△Pro基因细胞(87±15) ng/ml;未转vWF-△Pro基因时单独转重链基因的重链分泌水平很低,vWF-△Pro存在时重链分泌量明显提高,但不如共转基因时的重链分泌,提示轻链可反式促进重链分泌;单独转轻链或与重链共转基因时轻链分泌水平均较高,且不受vWF-△Pro影响;Coatest法检测分泌的凝血活性显示,转vWF-△Pro基因可使细胞分泌的凝血活性明显高于未转vWF-△Pro基因细胞(0.80±0.15 IU/ml vs 0.41±0.08 IU/ml).另外,转vWF-△Pro基因条件下,合并培养转重链和转轻链基因细胞的培养上清中,也检测到FⅧ凝血活性(0.23±0.09IU/ml),提示vWF-△Pro有助于分泌的重、轻链形成功能性异源二聚体.表明转vWF-△Pro基因可促进双链转FⅧ基因,为进一步动物体内实验奠定了基础.
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关 键 词: | 前肽缺失型 von Willebrand因子 凝血Ⅷ因子 双载体转基因 |
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