| 基于CRISPR-dCas9转录激活系统的毛果杨ANT转录因子功能分析 |
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| 作者姓名： | 孟令桐 苏丽伟 李祥欣 熊天圣 常攀鹏 刘孟卓 周晨光 |
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| 作者单位： | 1. 林木遗传育种全国重点实验室(东北林业大学);2. 上海科技大学生命科学与技术学院 |
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| 基金项目： | 国家级大学生创新训练项目（202210225168）；;国家自然科学基金项目（32001332）； |
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| 摘 要： | 基于CRISPR-dCas9的基因转录激活表达能够避免基因异位表达带来的表型干扰，同时使基因有效地特异性表达。该研究利用新型CRISPR-Act3.0表达系统，在毛果杨（Populus trichocarpa）中对维管形成层特异表达转录因子ANT(AINTEGUMENTA)进行基因转录激活，创制遗传材料，并对基因的功能进行分析。首先对毛果杨PtrANTs转录因子进行同源分析，选取其中的PtrANT-4进行后续研究，对该基因进行克隆并利用荧光定量PCR分析其在各组织中的表达情况；其次在PtrANT-4启动子上设计3条gRNAs，构建CRISPR-dCas9转录激活表达载体，利用原生质体瞬时转化法检测该载体的表达；最后将该表达载体利用农杆菌介导法转化毛果杨，获得PtrANT-4转录激活遗传材料。结果表明：毛果杨中有4个PtrANTs转录因子，选取的PtrANT-4基因CDS序列全长为2 058 bp，编码685个氨基酸，在毛果杨侧生分生组织维管形成层特异表达。基于CRISPR-Act3.0表达系统成功构建的转录激活载体，在毛果杨木质部原生质体中转化后具有激活PtrANT-4表达的作用。获得...
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| 关 键 词： | CRISPR-dCas9 基因激活表达 PtrANT 毛果杨 |
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