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改良法克隆淋球菌特征核酸片段
引用本文:余升红.改良法克隆淋球菌特征核酸片段[J].生物技术,2002,12(2):29-30.
作者姓名:余升红
作者单位:中山医科大学医学遗传教研室,广东,广州,510089
摘    要:目的:采用改良法克隆淋球菌特征核酸片段300bp到pBS.sk中,作为淋球菌检测试剂盒的阳性标本来源。方法:采用PCR扩增淋球菌特征核酸片段300bp,扩增条件:94℃30s,55℃1min,72℃1min,35个循环,另外用SmalI酶切,pBS,sk,与PCR产物采用改良法平端连接:连接温度14℃,72h,连接反应体积15μl,加10u SamlⅠ防止pBS.sk自连,连接完成后取5μl连接液转化200μlCaCl2制备的感受态受体菌JM109,用碱法提取重组子质粒,电泳比较质粒大小,PCR初筛,最后双酶切鉴定。结果:经过电泳比较质粒大小,PCR初筛,最后双酶切鉴定。结果:经过电泳比较质粒大小,PCR初筛,最后双酶切鉴定,得到5个克隆重组子。

关 键 词:特征核酸片段  淋球菌  基因克隆  改良法
文章编号:1004-311X(2002)02-0029-02
修稿时间:2001年10月16

Clone gonococcal specific nucleic acid flagment by improved method
Abstract:
Keywords:
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