| 产酸克雷伯氏菌M5al普鲁兰酶的异源表达及酶学性质研究 |
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| 引用本文： | 温亮亮,郭佳,关锋. 产酸克雷伯氏菌M5al普鲁兰酶的异源表达及酶学性质研究[J]. 工业微生物, 2015, 0(1) |
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| 作者姓名： | 温亮亮 郭佳 关锋 |
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| 作者单位： | 江南大学生物工程学院，糖化学与生物技术教育部重点实验室，江苏无锡214122 |
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| 摘 要： | 普鲁兰酶(EC 3.2.1.41)是一类淀粉脱支酶,能够特异性水解淀粉中的α-1,6-糖苷键,从而提高淀粉的利用率,在以淀粉为原料的食品、纺织、生物燃料和洗涤剂等行业中具有重要的应用价值。本研究以产酸克雷伯氏菌Klebsiella oxytoca M5al基因组DNA为模板,将PCR扩增得到的普鲁兰酶基因pul A克隆至表达载体p ET28a(+),构建好的重组质粒转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3),在培养基中添加0.5 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的条件下对该酶基因进行诱导表达,经镍柱纯化获得重组普鲁兰酶用于酶学性质研究。SDS-PAGE及Western Blot检测显示普鲁兰酶基因pul A在上述大肠杆菌宿主中成功获得了表达。该重组酶最适反应p H5.5,最适温度60℃。金属离子对酶活性有一定影响。Mn2+对酶活促进作用显著;Fe3+、Mg2+、Fe2+对酶活只有微弱的促进作用,而Cu2+对酶活造成强烈抑制。来源于Klebsiella oxytoca M5al的普鲁兰酶最适催化条件符合工业生产中淀粉糖化工艺的要求,具有应用于淀粉工业的潜力。
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| 关 键 词： | 产酸克雷伯氏菌 普鲁兰酶 异源表达 蛋白纯化 酶学性质 |
Heterologous expression and enzymatic properties of pullulanase from Klebsiella oxytoca M5 al |
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| WEN Liang-liang,GUO Jia,GUAN Feng. Heterologous expression and enzymatic properties of pullulanase from Klebsiella oxytoca M5 al[J]. Industrial Microbiology, 2015, 0(1) |
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| Authors: | WEN Liang-liang GUO Jia GUAN Feng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Klebsiella oxytoca pullulanase heterologous expression enzymatic properties |
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