| 携带新城疫病毒融合蛋白基因的重组减毒单核细胞增多性李斯特菌构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 徐晶靓,江玲丽,陈宁,帅江冰,方维焕.携带新城疫病毒融合蛋白基因的重组减毒单核细胞增多性李斯特菌构建与鉴定[J].微生物学报,2006,46(3):445-450. |
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| 作者姓名： | 徐晶靓 江玲丽 陈宁 帅江冰 方维焕 |
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| 作者单位： | 浙江大学动物预防医学研究所,浙江省动物预防医学重点实验室,杭州,310029 |
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| 摘 要： | 以鸡新城疫病毒F基因(NDV-F)为模式外源基因,通过基因切割-重叠延伸PCR法(SOE-PCR)将其插入到单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)毒力基因hly的启动子和信号肽序列下游,并将该融合片段克隆入穿梭质粒pKSV7,随后将重组质粒电转李斯特菌进行同源重组。NDV-F基因的PCR扩增表明该重组菌构建成功,RT-PCR结果表明F基因在重组菌中得到了转录。比较了重组菌和野生型菌株的溶血性、黏附和侵袭力、对小鼠和鸡胚的毒力和生长特性以及重组菌的体内外稳定性,结果表明:hly基因中F片段的整合消除了单核细胞增多性李斯特菌溶血素基因的表达,其培养上清液没有溶血性,而野生型菌株的溶血价达24;细胞试验表明重组菌对细胞的黏附力和相对侵袭力均有不同程度的降低,而相对侵袭力与野生型菌株具有显著性差异(P<0.05);重组菌对小鼠及鸡胚的毒力(LD50)与野生型相比分别下降3.7和6.5个对数数量级;重组菌在BHI肉汤和小鼠体内连续5次后,仍然可以扩增出目的基因NDV-F,初步表明该重组菌较为稳定。
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| 关 键 词： | 单核细胞增多性李斯特菌 同源重组 插入突变 李斯特菌溶血素O |
| 文章编号： | 0001-6209（2006）03-0445-06 |
| 收稿时间： | 2005-12-13 |
| 修稿时间： | 2006-01-24 |
Characterization of a recombinant Listeria monocytogenes strain containing the fusion protein gene of Newcastle disease virus |
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| XU Jing-jing,JIANG Ling-li,CHEN Ning,SHUAI Jiang-bing,FANG Wei-huan.Characterization of a recombinant Listeria monocytogenes strain containing the fusion protein gene of Newcastle disease virus[J].Acta Microbiologica Sinica,2006,46(3):445-450. |
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| Authors: | XU Jing-jing JIANG Ling-li CHEN Ning SHUAI Jiang-bing FANG Wei-huan |
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| Institution: | Zhejiang University Institute of Preventive Veterinary Medicine and Zhejiang Provincial Key Laboratory for Preventive Veterinary Medicine, Hangzhou 310029, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Listeria monocytogenes Homologous recombination Insertional mutation Listeriolysin O |
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