不同来源的脱氧核糖核酸酶在基因表达量分析中应用效果的比较研究

目的：比较在基因表达量分析中使用不同来源的脱氧核糖核酸酶（DNase）去除样本中残留DNA的应用效果差异，为研究者根据自己的实验需求选择合适的DNase提供依据。方法：选择国内外广泛使用的3种DNase，分别为Invitrogen DNase，T擞aRaDNase和TiandzDNase。按照各种DNase的说明书对Trizol法提取的胎盘总RNA中残留DNA进行降解，定量方法采用实时荧光PCR测定反转录后的cDNA量。比较各种DNase对不同浓度RNA样本中残留DNA的处理效率、RNA损失量、操作时间及成本等。结果：三种DNase酶均能够完全降解不同残留量的DNA（10ng、100ng及1恤g），实时荧光定量PCR均未检测到残留DNA。InvitrogenDNase对DNA的处理过程耗时最短，操作过程造成各种浓度RNA模板的损失量均最低，但成本最高；TaKaRaDNase处理的耗时居中，成本居中，RNA损失量最高，尤其对低浓度（〈100ng／μL）RNA样本；TiandzDNase处理的耗时最长，成本最低，RNA损失量居中，当模板浓度较高（〉500ng/μL）时，损失量相对减少。结论：不同来源的DNase在基因表达量分析中对样本处理的应用效果各不相同，在不同样本分析中可参考以下原则正确使用合适的DNase，以保证分析的顺利和结果的准确：对于RNA提取量较多的样本，三种DNase均可选择，但如考虑成本，首选TiandzDNase，如考虑耗时或RNA损失量，首选InvitrogenDNase，如既考虑耗时又考虑成本，可选TaKaRaDNase；对RNA提取量较少的血液或少量细胞（如单细胞）样本，应选择Invitrog—enDNase。

Comparison of Application Effects of Different Kinds of DNase in Gene Expression Analysis