黄芪甲苷Ⅳ通过影响β-actin对内皮型一氧化氮合酶的调节作用

目的：研究黄芪甲苷Ⅳ（AS-Ⅳ）对体外培养脐静脉内皮细胞中内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的调节作用及可能的机制。方法：培养人脐静脉内皮细胞系EA-Hy926，用AS-Ⅳ进行干预，同时给予或不给予骨架蛋白β—actin聚合稳定剂phalloidin，用免疫共沉淀方法检测eNOS与单体8-actin结合状态的变化，用L-3H．精氨酸转化为L-SH-瓜氨酸的同位素法测定eNOS活性，I^125环-磷酸鸟苷（cGMP）放射免疫法检测细胞内cGMP水平，Westernblotting方法检测细胞中eNOS和蛋白激酶B（Akt）磷酸化水平，总蛋白水平。结果：（1）AS-IV作用10min后，细胞内单体β—actin与eNOS的结合明显增加（P〈0．05或P〈0．01），预先给予phalloidin显著抑制了AS．IV引起的两者结合的增加（P〈0．01）。②AS—IV明显增加了eNOS活性（P〈0．05）、cGMP含量（P〈0．01）、eNOSSer-1177磷酸化水平（P〈0．01）、AktSer-473磷酸化水平（P〈0．001），预先给予phalloidin明显降低了AS—IV引起的eNOS活性（P〈0．05）、cGMP含量（P〈0．01）和磷酸化水平的增加（P〈0．01），但对Akt的磷酸化没有影响。结论：单体β—actin与eNOS的结合在AS-IV激活eNOS的过程中起着不可或缺作用，其主要是通过促进Akt对eNOSSer—1177的磷酸化来实现的。