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| 结核分枝杆菌CysA2抗原的基因克隆、表达及在血清诊断中的应用 | |
| 引用本文： | 吴华军,张佳,皱洪兴,王宇军,孙爱华. 结核分枝杆菌CysA2抗原的基因克隆、表达及在血清诊断中的应用[J]. 中国微生态学杂志, 2013, 25(3) |
| 作者姓名： | 吴华军 张佳 皱洪兴 王宇军 孙爱华 |
| 作者单位： | 1. 嘉兴市第一医院检验科,浙江嘉兴,314001 2. 浙江医学高等专科学校,浙江杭州 310053;温州医学院检验医学院和生命科学院,浙江温州 325035 3. 浙江医学高等专科学校,浙江杭州,310053 |
| 基金项目： | 浙江省卫生高层次创新人才培养工程项目，浙江医学高等专科学校博士基金项目 |
| 摘 要： | 目的 克隆并构建结核分枝杆菌CysA2基因原核表达系统,建立基于rCysA2的ELISA并检测rCys A2-ELISA在肺结核患者血清学诊断中的敏感性和特异性.方法 采用PCR扩增CysA2基因,构建CysA2基因原核表达系统.采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rCysA2表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rCysA2,免疫印迹鉴定rCysA2的免疫反应性.以rCysA2为包被抗原,建立rCysA2-ELISA并用于检测132例血清抗体,其中涂片阳性和阴性肺结核患者血清分别占96例和36例,非肺结核肺部疾病病人血清抗体30例,健康对照血清50例.结果 克隆的CysA2基因与GenBank中相关序列相似性为100％.rCysA2表达量为细菌总蛋白的25.4％.提纯的rCysA2在SDS-PAGE后显示为单一的蛋白条带.rCysA2-ELISA检测涂片阳性和涂片阴性的肺结核患者血清抗体检出率分别为63.5％和61.1％,50例健康对照全部阴性、30例非肺结核肺部疾病患者1例呈现阳性,此方法的灵敏度为62.9％(83/132),特异性为98.8％ (79/80).结论 本研究成功地克隆并构建了结核分枝杆菌CysA2基因及其原核表达系统.以rCysA2为包被抗原的rCysA2-ELISA方法有较高的灵敏度和很好的特异性,能有效检测涂片阴性患者血清抗体,rCysA2有望成为结核病血清诊断的有效候选抗原之一. |
| 关 键 词： | 结核分枝杆菌 CysA2基因 重组表达 酶联免疫吸附试验 血清学检测 |
Cloning and expression of CysA2 antigen in Mycobacterium tuberculosis and its serodiagnostic analysis |
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