| 摘 要： | 目的探究槲皮苷对TNF-α诱导的结肠腺癌细胞(colorectal adenocarcinoma cell, Caco-2)单层膜肠上皮屏障功能损伤的保护作用及其机制。方法 Caco-2细胞接种于镶嵌0.4μm孔径Transwell小室聚碳酸酯膜上,并培养21d以获得Caco-2细胞单层膜。接着,将Caco-2细胞单层膜随机分空白对照组(未用任何药物处理)、单纯TNF-α组(仅用100ng/mL TNF-α处理72h)、TNF-α+槲皮苷低、中、高剂量组(分别用25、50和100μmol/L槲皮苷预处理30min后,再用100ng/mL TNF-α处理72h)。采用MTT法检测细胞活力,采用ELISA和RT-qPCR分别检测各组中白介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、白介素6(interleukin 6,IL-6)和环氧化酶2(cyclooxygenase 2,COX-2)分泌水平和mRNA表达水平,采用跨上皮电阻(transepithelial electrical resistance,TEER)和FITC标记葡聚糖40 kD(FITC-dextran 40kD,FD-40)通量评估各组Caco-2细胞单层膜的渗透性,采用免疫荧光检测各组中闭合蛋白(occludin)和闭锁小带蛋白1(zonula occludens protein1,ZO-1)的分布,采用Western blot分析各组中occludin、 ZO-1、肌球蛋白轻链激酶(myosin light-chain kinase,MLCK)和磷酸化的肌球蛋白轻链(phosphorylated myoglobin light chain,p-MLC)水平。结果槲皮苷抑制Caco-2细胞单层膜中TNF-α诱导的促炎因子IL-1β、IL-6和COX2分泌水平和mRNA表达水平,减弱TNF-α诱导的TEER下降和FD-40通量增加,改善TNF-α诱导的occludin和ZO-1的分布和水平。此外,槲皮苷显著抑制TNF-α诱导的MLCK和p-MLC表达增加。结论槲皮苷可减轻TNF-α诱导的Caco-2细胞单层膜肠上皮屏障损伤,MLCK/p-MLC信号抑制可能是其保护作用的机制之一。
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