淡水瓦氏雅罗鱼基因文库的构建和抗冻蛋白基因同源序列的筛选 |
| |
引用本文: | 费云标,于建康,陈良标,王亚平,王为先,毛钟荣,严绍颐,靳光琴.淡水瓦氏雅罗鱼基因文库的构建和抗冻蛋白基因同源序列的筛选[J].基因组蛋白质组与生物信息学报,1996(1). |
| |
作者姓名: | 费云标 于建康 陈良标 王亚平 王为先 毛钟荣 严绍颐 靳光琴 |
| |
作者单位: | 中国科学院发育生物学研究所,广西水产研究所 |
| |
摘 要: | 极地海域中的鱼类非常耐寒。它们的血液里常含有两种能降低其体内冰点的蛋白质:抗冻糖蛋白(AFGP)和不含糖的抗冻蛋白或抗冻多肽(AFP)。这些蛋白的编码基因已经被克隆,并将黄盖鲽AFP导入虹鳟鱼和大西洋鲑鱼,而改变了它们的抗冻性能。为开展中国的抗冻转基因鱼研究,本项目对中国北方的耐寒淡水鱼的抗冻基因进行了分离研究。所用实验材料鱼为中国内蒙古北部生活的瓦氏雅罗鱼(Leuciscuswaleckii),属鲤形目(Lypciniformes),鲤科(Lyprinidae),雅罗鱼亚科(Leucisinae)。基本按标准方法构建瓦氏雅罗鱼的基因文库,只在包装反应至30分钟时,再加一份BHB2690制备物,并延长30分钟反应时间。所得文库的成斑率大于1×105pfu。已知AFP基因常常多至40个拷贝,故已够用。采用通用的原位分子杂交和Southern分析进行瓦氏雅罗鱼AFP基因同源序列的分离及其亚克隆分析。以北美黄盖鲽AFP基因片段为探针,从瓦氏雅罗鱼DNA文库中筛选了三个阳性克隆。图一所示为其中一个的双份膜及其复筛结果。图二为这个阳性克隆DNA经过三种限制酶切后,同时与北美黄盖鲽AFP基因片段和该基因0.4KbcDN
|
本文献已被 CNKI 等数据库收录! |
|