| CH50真核表达载体pCH503的构建及小鼠体内表达的趋化与抗肿瘤活行 |
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| 引用本文： | 黄波,冯作化,李东,张桂梅,张慧. CH50真核表达载体pCH503的构建及小鼠体内表达的趋化与抗肿瘤活行[J]. 中国生物化学与分子生物学报, 2000, 16(6) |
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| 作者姓名： | 黄波 冯作化 李东 张桂梅 张慧 |
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| 作者单位： | 同济医科大学医学分子生物学研究室武汉 430030 |
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| 基金项目： | ,国家自然科学基金,教育部跨世纪优秀人才培养计划 |
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| 摘 要： | 构建重组FN多肽CH50真核表达载体并在小鼠体内表达,研究其趋化与抗肿瘤作用.采用重组DNA技术构建表达质粒;体内进行基因转染,采用RT-PCR鉴定导入基因的表达;通过肝素亲和层析、SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物;腹腔细胞计数、Giemsa染色分析以及肌肉组织切片与染色观察体内基因转染后的趋化作用;小鼠黑色素瘤模型研究基因转染抑制肿瘤的作用.从CH50原核表达载体获得重组多肽的cDNA,5＇端加上小鼠IFN-γ5＇端非编码区和信号肽编码区的cDNA,3＇端加上人FN cDNA的3＇端非编码区;将重组cDNA插入pREP8质粒,即构建出pCH503质粒.巨噬细胞在体内经pCH503转染,然后在体外培养,能够产生CH50多肽.以pCH503分别进行腹腔基因转染和肌肉内基因转染,均可对免疫细胞产生趋化作用;pCH503体内转染可以使小鼠腹腔内黑色素肿瘤结节数降低50%～601.CH50真核表达载体pCH503可在小鼠体内表达,体内基因转染可趋化免疫细胞和抑制肿瘤结节形成,在肿瘤综合治疗中有重要意义.
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| 关 键 词： | 纤维粘连蛋白 重组多肽 趋化 肿瘤 |
Construction of Eukaryotic Expressing Vector pCH503 of CH50 and Its Chemotaxis and Anti-tumor Function by Expression in vivo in Mice |
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