| 利用Red重组系统敲除大肠杆菌 O157:H7的waaL 基因 |
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| 引用本文： | 杨公进,马中瑞,信国,陈敏.利用Red重组系统敲除大肠杆菌 O157:H7的waaL 基因[J].中国生物工程杂志,2011,31(10):83-87. |
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| 作者姓名： | 杨公进 马中瑞 信国 陈敏 |
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| 作者单位： | 山东大学生命科学院微生物技术国家重点实验室 国家糖工程技术研究中心 济南 250100 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，国家"863"计划，山东省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的:利用λ噬菌体Red重组系统敲除大肠杆菌O157:H7的waaL基因。方法:以pKD4为模板扩增出与waaL基因上下游同源的、含有卡那霉素抗性基因的PCR产物。然后电击转化到大肠杆菌 O157:H7 中,利用Red重组系统,通过卡那霉素抗性基因两侧的waaL基因序列在体内与waaL基因发生同源重组,置换了 O157:H7 基因组中的waaL基因。并进一步利用卡那霉素抗性基因两侧的FRT位点,通过FLP位点专一性重组将卡那霉素抗性基因敲除。结果:成功构建了敲除waaL基因且不带卡那霉素抗性基因的菌株。
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| 关 键 词： | O157:H7 &lambda -Red重组系统 waaL基因 |
| 收稿时间： | 2011-05-12 |
| 修稿时间： | 2011-06-03 |
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