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| 人GLP -1- IgG Fc融合蛋白在毕赤酵母中的高效表达 | |
| 引用本文： | 王圣钧,郁慧丽,翟琳,王倚,梁泉峰,祁庆生.人GLP -1- IgG Fc融合蛋白在毕赤酵母中的高效表达[J].生物技术,2011,21(4). |
| 作者姓名： | 王圣钧 郁慧丽 翟琳 王倚 梁泉峰 祁庆生 |
| 作者单位： | 1. 山东大学生命科学学院微生物技术国家重点实验室,山东济南,250100 2. 山东大学国家糖工程技术研究中心,山东济南,250100 3. 山东大学生命科学学院微生物技术国家重点实验室,山东济南250100;山东大学国家糖工程技术研究中心,山东济南250100 |
| 基金项目： | 山东省自然科学基金项目 |
| 摘 要： | 目的:构建GLP-1-IgG Fc融合蛋白分子并在毕赤酵母中实现高效表达.方法:使用蛋白质工程技术改造GLP -1,去除其蛋白酶降解位点,然后利用重叠延伸PCR方法得到改造后的GLP -1与人IgG-Fc片断的嵌合体基因并将其插入pPIC9K载体中.以重组载体转化巴斯德毕赤酵母菌中进行表达.采用SDS-PAGE和Western Blot方法检测重组蛋白的表达.结果:成功的构建了GLP -1-IgG Fc嵌合体基因并使其在重组毕赤酵母中高效分泌表达.在25℃条件下,摇瓶培养添加0.5％甲醇诱导72h后融合蛋白的表达量最大,为5mg/L.SDS-PAGE和Westem-Blot结果表明表达产物为GLP -1-IgG Fc融合蛋白.结论:获得了高效表达GLP -1-IgG Fc融合蛋白的毕赤酵母菌株,为GLP -1-IgG Fc的活性和半衰期测定及下一步的开发奠定了基础,并为在毕赤酵母菌中表达其他Fc融合蛋白和抗体提供了参考. |
| 关 键 词： | 胰高血糖素样肽-1 Fc融合蛋白 巴斯德毕赤酵母菌 高效表达 |
Expression of Human GLP-1-IgG Fc Fusion Protein in Pichia pastoris |
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| WANG Sheng-jun,YU Hui-li,ZHAI Lin,WANG Qian,LIANG Quan-feng,QI Qing-sheng.Expression of Human GLP-1-IgG Fc Fusion Protein in Pichia pastoris[J].Biotechnology,2011,21(4). | |
| Authors: | WANG Sheng-jun YU Hui-li ZHAI Lin WANG Qian LIANG Quan-feng QI Qing-sheng |
| Institution: | WANG Sheng-jun1,YU Hui-li1,ZHAI Lin1,WANG Qian2,LIANG Quan-feng1,QI Qing-sheng1,2(1.State Key Laboratory of Microbial Technology,School of Lfe Science,Shandong University,Jinan 250100,China,2.National Glycoengineering Research Center,China) |
| Abstract: | Objective:Construct and high-effectively express the fusion protein GLP-1-IgG Fc in the Pichia pastoris.Method:Modified the sequence of GLP-1 by eliminating its peptide enzymes sites.The chimeric gene GLP-1-IgG Fc achieved through gene splicing by overlap extension(SOE) method was cloned into pPIC9K and transformed into Pichia pastoris.The fusion protein was expressed in Pichia pastoris and analyzed using SDS-PAGE and Western Blot.Result:The chimeric gene GLP-1-IgG Fc and yeast expression vector pPIC9k/GLP-... |
| Keywords: | glucagon-like peptide-1 Fc fusion protein Pichia pastoris high level expression |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ | |