| 重组PLZF蛋白锌指结构域的表达、提纯和活性分析 |
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| 引用本文： | 李伟.重组PLZF蛋白锌指结构域的表达、提纯和活性分析[J].中国生物工程杂志,2011,31(11):1-5. |
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| 作者姓名： | 李伟 |
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| 作者单位： | 上海交通大学系统生物医学研究院 教育部系统生物医学重点实验室 上海 200240 |
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| 基金项目： | 上海市自然科学基金资助项目(11ZR1416800) |
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| 摘 要： | PLZF(promyelocytic leukaemia zinc finger protein)是一种重要的转录抑制因子,它由位于N端的BTB结构域和C端的锌指结构域构成。鉴于目前对于锌指结构域的立体结构还不是十分清楚,对其进行了高效表达和提纯。为了表达PLZF蛋白的锌指结构域,在其编码序列的5'端加上起始密码ATG后插入到表达载体PET-11a的多克隆位点。构建好的表达质粒转化到BL21 (DE3)大肠杆菌内并用IPTG诱导表达,发现重组蛋白主要以不溶性的包涵体形式在胞内表达。用含有SDS变性剂的缓冲液溶解包涵体后,采用凝胶过滤方法将重组蛋白纯化到纯度达96%以上。对纯化后的蛋白质用反透析的方法进行复性,然后用DNA结合实验进行活性分析,发现复性后的蛋白质具有特异的DNA结合活性,这为进一步研究PLZF蛋白锌指结构域的立体结构打下了重要基础。
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| 关 键 词： | PLZF蛋白 锌指结构域 包涵体 凝胶迁移分析 |
| 收稿时间： | 2011-07-21 |
| 修稿时间： | 2011-08-31 |
Expression, Purification and Characterization of the Zinc Finger Domain of PLZF Protein |
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| LI Wei.Expression, Purification and Characterization of the Zinc Finger Domain of PLZF Protein[J].China Biotechnology,2011,31(11):1-5. |
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| Authors: | LI Wei |
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| Institution: | LI Wei(Shangahi Center for Systems Biomedicine,Key Laboratory of Systems Biomedicne,Ministry of Education, Shanghai Jiao Tong University,Shanghai 200240,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PLZF protein Zinc finger domain Inclusion body EMSA |
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