构建抑制NF-кB信号通路的药物筛选模型 |
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引用本文: | 张立鹏,李成海,刘明耀,罗剑.构建抑制NF-кB信号通路的药物筛选模型[J].激光生物学报,2010,19(5). |
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作者姓名: | 张立鹏 李成海 刘明耀 罗剑 |
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作者单位: | 华东师范大学生命科学学院生命医学研究所,上海,200241 |
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基金项目: | 上海市科委研发公共服务平台项目,国家自然科学基金项目 |
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摘 要: | NF-кB已被证明在肿瘤和炎症过程中起到至关重要的作用.因此,建立抑制NF-кB信号通路的药物筛选模型至关重要.利用荧光素酶报告基因技术与蛋白印迹技术分别探索TNFα处理浓度及时间对NF-кB报告基因表达和NF-кB抑制亚单位IкBα降解的影响,进而构建NF-кB信号通路抑制剂药物筛选模型.实验结果表明,0.01 nmol/L TNFα作用24 h即能刺激HEK293T细胞中NF-кB报告基因较高水平的表达,且其表达量与TNFα的剂量和处理时间呈正相关性;0.01 nmol/L TNFα作用5 min即能使Pane-28细胞中IкBα明显降解,20min~30 min几乎降解完全,之后IKBa含量又开始增加.NF-кB阳性抑制剂藤黄酸验证表明NF-кB萤光素酶报告基因检测筛选体系和NF-кB抑制亚单位降解筛选体系两种体系稳定可行.结果证明,两种模型可以用于NF-кB信号通路抑制剂药物的筛选.
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关 键 词: | NF-кB 药物筛选模型 TNFα IкBα 藤磺酸 |
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