海枣曲霉β-D-岩藻糖苷酶的研究

虽然芦β-D-岩藻糖苷酶(EC3．2．1，38)已从多种动植物中分离纯化，但因它们的专一性均不高而难以确证。我们从海枣曲霉(Aspergillus phoenicis)培养物中提取，经过PEG6000-磷酸缓冲液双水相分离，相继用DEAE—sepbadev A-50、羟基磷灰石、Sephadex G-100等柱层析分离，获得了凝腔电泳均一的β-D-岩藻糖苷酶，比话力提高500倍。酶反应的最适条件为40℃和pH 6.0，在35℃以下和pH5．5—6.5稳定。凝胶过滤法测分子量为50000—60000，用SDS—PAGE测出分子量为57000。酶的Km值为2.4mmol／L，Vmax为12．8μmol·min-1·mg-1。金属离子Ag+．Hg2+对酶有强抑制作用，巯基乙醇和牛血清清蛋白以及甘油和多种糖能提高酶活力。化学修饰结果表明，-SH、-COOH基团和组氨酸，色氨酸残基为酶活力所必需。该酶只能水解pNPβ-D-岩藻糖苷，有严格的底物专一性，并能专一地受D-岩藻培和D-岩藻糖酸-r-内酯所抑制，为迄今为止最专一的β-D-岩藻钠苷酶，堪称该酶的典型代表。