| 2型猪链球菌葡萄糖胺-6-磷酸脱氨酶基因的克隆表达及酶活性测定 |
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| 引用本文： | 钱思彤,龚秀芳,丁晨曦,胡丹,艾乐乐,诸葛尧尧,王长军. 2型猪链球菌葡萄糖胺-6-磷酸脱氨酶基因的克隆表达及酶活性测定[J]. 生物技术通讯, 2019, 0(2): 175-180 |
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| 作者姓名： | 钱思彤 龚秀芳 丁晨曦 胡丹 艾乐乐 诸葛尧尧 王长军 |
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| 作者单位： | 徐州医科大学;解放军东部战区疾病预防控制中心 |
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| 基金项目： | 国家传染病重大专项(2018ZX10713-003-001-010);国家自然科学基金(81471920);传染病数据收集及平台应用推广(2017ZX10303401-007);军队后勤项目(16J020) |
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| 摘 要： | 目的:克隆表达2型猪链球菌葡萄糖胺-6-磷酸脱氨酶(NagB)编码基因,并测定其酶反应体系活性。方法:根据2型猪链球菌05ZYH33基因组序列,全合成nagB基因(ssu05_0195),并将其克隆至pET32a载体,在大肠杆菌中表达;利用Ni亲和层析柱纯化表达产物,获得纯化的NagB蛋白,Western印迹鉴定后测定其酶反应体系活性。结果:在大肠杆菌中高效表达了nagB基因,重组NagB相对分子质量约为56×10~3;在25℃、pH9.5、底物浓度为15 mmol/L、反应40 min时,NagB酶促反应体系表现出最大活性;在最适条件下,2型猪链球菌中NagB酶促反应体系的体外活性为3.73 U/mL,酶比活为12.43 U/mg。结论:2型猪链球菌05ZYH33中含有编码NagB的nagB基因,在原核系统中表达的NagB蛋白具有酶学活性。
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| 关 键 词： | 2型猪链球菌 葡萄糖胺-6-磷酸脱氨酶 原核表达 酶活性 |
Gene Cloning,Expression and Enzymatic Activity Determination of the Glucosamine-6-Phosphate Deaminase in Streptococcus suis Serotype 2 |
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| QIAN Si-Tong,GONG Xiu-Fang,DING Chen-Xi,HU Dan,AI Le-Le,ZHUGE Yao-Yao,WANG Chang-Jun. Gene Cloning,Expression and Enzymatic Activity Determination of the Glucosamine-6-Phosphate Deaminase in Streptococcus suis Serotype 2[J]. Letters in Biotechnology, 2019, 0(2): 175-180 |
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| Authors: | QIAN Si-Tong GONG Xiu-Fang DING Chen-Xi HU Dan AI Le-Le ZHUGE Yao-Yao WANG Chang-Jun |
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| Affiliation: | (Xuzhou Medical University,Xuzhou 221004,China;Center for Disease Control and Prevention,Eastern Theater of PLA,Nanjing 210002,China) |
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| Abstract: | QIAN Si-Tong;GONG Xiu-Fang;DING Chen-Xi;HU Dan;AI Le-Le;ZHUGE Yao-Yao;WANG Chang-Jun(Xuzhou Medical University,Xuzhou 221004,China;Center for Disease Control and Prevention,Eastern Theater of PLA,Nanjing 210002,China) |
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| Keywords: | Streptococcus suis seroptype 2 glucosamine-6-phosphate deaminase prokaryotic expression enzymatic activity |
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