一种改良的拟南芥原生质体的制备和转化方法 |
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引用本文: | 史勇,金维环,刘姣姣,王林会,陈彦惠.一种改良的拟南芥原生质体的制备和转化方法[J].生物技术,2019(2). |
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作者姓名: | 史勇 金维环 刘姣姣 王林会 陈彦惠 |
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作者单位: | 河南农业大学农学院;河南农业大学生命科学学院 |
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摘 要: | 目的]为了降低拟南芥原生质体制备的试验成本,缩短制备时间,降低转化所用质粒的浓度和提高转化效率。方法]实验以胶带法为基础,比较多种普通胶带去除拟南芥叶片下表皮的效果,通过增加裂解叶片用量,设计不同质粒浓度梯度转化原生质体,调整转化过程中PEG处理时间和对原生质体进行暗培养。结果]发现普通纸质和布质胶带去除拟南芥叶片下表皮效果良好。将叶片酶解时间缩短到20~30 min,转化质粒用量降低到5μg/6~10×104个原生质体;将PEG转化处理时间延长到30 min,利用暗培养降低了原生质体死亡率;用冰水混合物保存原生质体,24 h内不影响转化效率。结论]改良后的胶带法制备原生质体成本低、用时短、转化效率高、可操作性强。
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