基于CRISPR/Cas9加工番茄α-Man突变体的构建 |
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引用本文: | 张圆圆,邵冬南,崔百明.基于CRISPR/Cas9加工番茄α-Man突变体的构建[J].生物技术通报,2019(6). |
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作者姓名: | 张圆圆 邵冬南 崔百明 |
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作者单位: | 石河子大学生命科学学院石河子大学农业生物技术重点实验室 |
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摘 要: | 为培育成熟果实软化程度低,货架期长的番茄植株,以加工番茄甘露糖苷酶基因(α-Man)为编辑对象,设计由番茄U6启动子驱动、长21 bp的guide RNA(gRNA)指导hCas9核酸酶,靶向编辑α-Man的第1个外显子。首先构建基于CRISPR/Cas9系统的植物表达载体,并通过农杆菌介导的遗传转化获得加工番茄转基因株系,然后取转基因番茄叶片基因组DNA,利用限制性内切酶法结合PCR扩增对α-Man编辑位点附近的DNA片段进行检测及测序分析。结果表明,14株转基因番茄植株有2株检测到突变现象。α-Man突变体TA克隆测序结果显示有2种编辑类型,一种表现为52 bp的缺失突变;另一种表现为单碱基突变。实现了对番茄α-Man的编辑。
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