甘露醇磷酸化酶基因的敲除对D-甘露醇合成的影响 |
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引用本文: | 赵雅童,何光明,瓮茹茹,石爱琴,路福平,李玉.甘露醇磷酸化酶基因的敲除对D-甘露醇合成的影响[J].生物技术通报,2019(5). |
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作者姓名: | 赵雅童 何光明 瓮茹茹 石爱琴 路福平 李玉 |
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作者单位: | 省部共建食品营养与安全国家重点实验室工业微生物教育部重点实验室天津科技大学生物工程学院 |
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摘 要: | 为了探究甘露醇分解利用途径对甘露醇合成的影响,在重组菌株R_1(K-12/pTrc99a-mdh)的基础上,通过CRISPR/Cas9敲除E.coli PTS系统中的cmtA、cmtB、mtlA基因,阻断了E. coli K-12中甘露醇的分解途径,获得了重组菌株R_3(K-12/?cmtA?cmtBmdh~+)和R_5(K-12/?cmtA?cmtB?mtlAmdh~+)。与出发菌株R_1相比,R_3的生长速率没有降低,而R_5的生长速率明显下降。并且R_5在以甘露醇为唯一碳源的培养基上已无法生长,说明cmtA、cmtB、mtlA三个基因全部敲除后,菌株已无法再利用甘露醇作为碳源进行生长。最后,构建的重组菌株R_5,测得MDH酶活力为258 U/mL,用高效液相色谱对胞外产物进行检测,可检测到少量的甘露醇,为进一步探究大肠杆菌合成甘露醇的调控机制奠定基础。
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