| 大肠杆菌细胞裂解系统的构建及其在真菌毒素降解酶表达中的应用 |
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| 引用本文： | 赵程程,孙长坡,常晓娇,伍松陵,林振泉.大肠杆菌细胞裂解系统的构建及其在真菌毒素降解酶表达中的应用[J].中国生物工程杂志,2019,39(4):69-77. |
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| 作者姓名： | 赵程程 孙长坡 常晓娇 伍松陵 林振泉 |
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| 作者单位： | 国家粮食和物资储备局科学研究院 粮油加工研究所 北京 100037 |
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| 基金项目： | * 公益性行业(粮食)科研专项(201513006);国家自然科学基金资助项目(U1604234) |
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| 摘 要： | 目的:大肠杆菌中分泌表达重组蛋白受限于其分泌效率,为此设计构建大肠杆菌诱导裂解系统以实现胞内重组蛋白的快速高效分泌。方法:利用大肠菌素E7对细胞的裂解能力,构建共表达目标重组蛋白和E7的大肠杆菌细胞裂解系统,使目标重组蛋白在E7表达后得以释放到培养基中。结果:首先以红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)为报告基因,在pET28a(+)载体上构建大肠杆菌素E7和红色荧光蛋白两个表达盒,通过对比分析IPTG一步诱导和IPTG-阿拉伯糖分步诱导系统蛋白质的表达效果,发现分步诱导系统能够更高效地表达并释放目标蛋白到培养基。在IPTG-阿拉伯糖分步诱导裂解系统中表达玉米赤霉烯酮降解酶基因,培养基上清液中检测到玉米赤霉烯酮降解酶有较好的表达量和较高的活性,能够在37℃反应30min的条件下降解约5. 8μg玉米赤霉烯酮毒素。结论:利用大肠菌素E7成功构建大肠杆菌细胞裂解系统,并且此系统在快速释放胞内表达外源蛋白方面有适用性。
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| 关 键 词： | 大肠杆菌 细胞裂解系统 红色荧光蛋白 玉米赤霉烯酮降解酶 |
| 收稿时间： | 2018-08-21 |
Construction and Application of Cell Lysis Systems in the Expression of Mycotoxin Degrading Enzyme in Escherichia coli |
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| Cheng-cheng ZHAO,Chang-po SUN,Xiao-jiao CHANG,Song-ling WU,Zhen-quan LIN.Construction and Application of Cell Lysis Systems in the Expression of Mycotoxin Degrading Enzyme in Escherichia coli[J].China Biotechnology,2019,39(4):69-77. |
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| Authors: | Cheng-cheng ZHAO Chang-po SUN Xiao-jiao CHANG Song-ling WU Zhen-quan LIN |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | E coli Cell lysis system Red fluorescent protein Zearalenone degrading enzyme |
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