环状芽孢杆菌C-2几丁酶基因的克隆

环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)C-2总DNA经PstI部分酶切后分离2～10kb的片段，插入质粒pUC19的PstI位点，转化大肠杆菌(Escherichia coli)，利用几丁质平板从约8000个重组子中筛选到一个几丁酶基因阳性克隆(命名为pCHT1)。用12种限制酶对重组质粒进行的酶切分析表明，重组质粒中的插入片段长3.0kb，其中各有一个KpnI,SacI和SspI位点。把该克隆片段反向插入pUC19的PstI位点所得到的重组子同样具有几丁酶基因表达活性，说明此片段含有一个完整的几丁酶基因，其自身的启动子能被大肠杆菌转录系统所识别。Southern杂交证实了该片段来自于B.circulans C-2基因组，且以单拷贝形式存在，它不能与来自于其它7株几丁酶产生菌的总DNA杂交。