| 内生多粘类芽胞杆菌纤溶酶基因PPFE-Ⅰ在大肠杆菌中融合表达及活性分析 |
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| 引用本文： | 吕凤霞,陆兆新,别小妹,林谦,张充,曹林,郭瑶,汤彦种.内生多粘类芽胞杆菌纤溶酶基因PPFE-Ⅰ在大肠杆菌中融合表达及活性分析[J].生物工程学报,2010,26(8). |
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| 作者姓名： | 吕凤霞 陆兆新 别小妹 林谦 张充 曹林 郭瑶 汤彦种 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)，江苏省高新技术计划，江苏省科技支撑计划 |
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| 摘 要： | 以内生多粘类芽胞杆菌EJS-3基因组DNA为模板,PCR扩增PPFE-Ⅰ基因,并克隆到pMD19-T载体上,构建克隆载体pMD-PPFE-Ⅰ,经测序正确后,将PPFE-Ⅰ基因克隆至表达载体pET-DsbA上构建重组表达质粒pET-DsbA/PPFE-Ⅰ,将其转化至E.coli BL21(DE3),在IPTG诱导下实现了融合蛋白DsbA-PPFE-Ⅰ的表达,表达产物酶活性达228 IU/mL.表达产物用SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定.SDS-PAGE电泳检测表明融合蛋白主要以可溶形式表达,占菌体总蛋白的18.4%.Western blotting结果表明在相应分子量处有一条特异性条带,证实该蛋白为DsbA-PPFE-Ⅰ融合蛋白.表达产物通过Ni亲和柱、凝血酶酶切及Scphadex G-100等步骤进行分离纯化,并用MALDI-TOF质谱对重组酶进行了鉴定.纯化后的表达产物在纤维蛋白平板上表现出明显的纤溶活性.
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| 关 键 词： | 内生菌 多粘类芽胞杆菌 纤溶酶 基因克隆 融合表达 |
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