| 一种增加重组毕赤酵母拷贝数提高胰岛素前体产量的策略 |
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| 引用本文： | 龚香艺,丁重阳,刘立明,吴静.一种增加重组毕赤酵母拷贝数提高胰岛素前体产量的策略[J].微生物学报,2013,53(6):545-552. |
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| 作者姓名： | 龚香艺 丁重阳 刘立明 吴静 |
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| 作者单位： | 1. 江南大学食品科学与技术国家重点实验室,无锡214122;江南大学工业生物技术教育部重点实验室,无锡214122
2. 江南大学无锡医学院,无锡214122;江南大学工业生物技术教育部重点实验室,无锡214122 |
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| 基金项目： | 中组部首批青年拔尖人才支持计划;江苏省杰出青年基金(BK2012002);教育部创新团队发展计划(IRT1249);国家自然科学基金(31101229) |
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| 摘 要： | 目的] 为了进一步提高毕赤酵母表达生产人胰岛素前体的产量,方法] 将构建的表达载体pPICZα-IP 电转至毕赤酵母X-33中,在100 μg/mL zeocin的YPDS抗性平板筛选获得过量表达人源胰岛素前体(IP)的重组菌株B4和S6.在此基础上,以过量表达胰岛素前体的B4和S6为出发菌株,以SacI线性化的表达载体pPICZα-IP进行重复电转化,并在1000 μg/mL zeocin的YPDS平板上筛选获得一株拷贝数为7的重组毕赤酵母2B4.结果] 该菌株在5L规模发酵罐上,人源胰岛素前体产量是低拷贝数菌株B7的2.7倍,且菌体并未因拷贝数高而表现出生长不良的现象.实时定量PCR检测后,发现2B4菌株胰岛素前体基因的转录水平是B7的2倍.结论] 综上结果表明,采用抗性筛选和重复电转相结合的高拷贝重组毕赤酵母构建策略,能有效促进目的基因的转录水平,最终显著提高目标蛋白的产量.
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| 关 键 词： | 多拷贝重组毕赤酵母 胰岛素前体产量 重复电转 pPICZα |
| 收稿时间： | 1/3/2013 12:00:00 AM |
| 修稿时间： | 3/7/2013 12:00:00 AM |
Enhancement of human insulin precursor production by increasing the copy number in Pichia pastoris |
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| Xiangyi Gong,Chongyang Ding,Liming Liu and Jing Wu.Enhancement of human insulin precursor production by increasing the copy number in Pichia pastoris[J].Acta Microbiologica Sinica,2013,53(6):545-552. |
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| Authors: | Xiangyi Gong Chongyang Ding Liming Liu and Jing Wu |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Multi-copy recombinant Pichia pastoris insulin precursor repeatedly electroporation pPICZα vector |
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