| 人绒毛膜促性腺激素β亚基和绵羊垂体促性腺激素共有α亚基组成的单链多肽的生物合成 |
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| 引用本文： | 谢黎,李昌麟,沈惠,申庆祥,王健.人绒毛膜促性腺激素β亚基和绵羊垂体促性腺激素共有α亚基组成的单链多肽的生物合成[J].分子细胞生物学报,1998(1). |
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| 作者姓名： | 谢黎 李昌麟 沈惠 申庆祥 王健 |
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| 作者单位： | 中国科学院上海细胞生物学研究所，中国科学院上海细胞生物学研究所，中国科学院上海细胞生物学研究所，中国科学院上海细胞生物学研究所，上海计划生育科学研究所 上海 200031，上海 200031，上海 200031，上海 200031 上海计划生育科学研究所，上海200032，上海 200032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，国家高科技项目基金~~ |
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| 摘 要： | 采用重叠PCR方法,将人绒毛膜促性腺激素β亚基(hCGβ)cDNA3'端与绵羊垂体促性腺激素共有α亚基(oLHα)cDNA 5'端串联起来,构建了hCGβ-oLHα嵌合cDNA。将嵌合cDNA克隆入核型多角体病毒(AcNPV)表达载体pVL1393得到表达型质粒pVL1393-hCGβ-oLHα,并与BaculoGold~(TM)线性化AcNPV基因组DNA共转染昆虫细胞Sf9,筛选得到重组病毒AcNPV-hCGβ-oLHα。以扩增后的重组病毒感染昆虫细胞进行表达,并进一步经偶联抗hCGβ单抗亲和层析柱纯化得到hCGβ-oLHα单链多肽。SDS-PAGE银染和免疫印迹分析结果表明表达产物在非还原条件下表观分子量约40.5kD,还原条件下约为38.0kD,这说明表达产物具有链内二硫链及次级构象。竞争抑制~(125)I-hCGβ与抗体结合的检测结果表明其与hCGβ抗体结合活性较天然hCG弱,但较天然hCGβ略有增加。由此可见单链多肽作为抗hCG夏合抗原避孕疫苗的靶抗原,具有潜在的应用前景。
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| 关 键 词： | hCGβ-oLHα嵌合cDNA 重叠PCR 重组病毒 昆虫细胞Sf9 表达 |
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