康氏木霉(Trichoderma koningii)纤维素酶系中β-葡萄糖苷酶的提纯与性质

从康氏木霉培养抽提液中分离提纯了β-葡萄糖苷酶。提纯步骤通过DEAE SephadexA-50、SE Sephadex C-50和Sephadex G-75柱层析三步纯化。提纯后比活提高766倍,回收率为25.8%。经硷性和酸性Disc电泳以及SDS凝胶电泳鉴定均为单一带。用SDS凝胶电泳测得该酶的分子量为77000。用加温、改变pH或化学变性剂(SDS)处理均能使酶失活并且改变该酶的凝胶电泳行为,揭示该酶有亚基存在的可能性。用底物(纤维二糖)或竞争性抑制剂(葡萄糖酸δ-内酯)能保护该酶使其酶活和电泳行为基本上不改变或变化较小。δ-内酯的K_(?)比K_m要小二到三个数量级,它很可能是该酶底物过渡态中间物的类似物。