| 染色体外同源重组结合细胞质注射途径研制转基因小鼠 |
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| 引用本文： | 耿艳艳,端家忠,李勇,宁涛,张靖溥. 染色体外同源重组结合细胞质注射途径研制转基因小鼠[J]. 遗传学报, 2004, 31(6): 572-577 |
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| 作者姓名： | 耿艳艳 端家忠 李勇 宁涛 张靖溥 |
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| 作者单位： | 1. 中国科学院遗传与发育生物学研究所,北京,100080;中国科学院研究生院,北京,100039
2. 中国科学院遗传与发育生物学研究所,北京,100080 |
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| 基金项目： | 中国科学院知识创新工程项目 (编号 :KSCX2 3 0 8 0 2 )，北京市自然科学基金重点项目 (编号 :5 0 2 10 0 2 )资助~~ |
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| 摘 要： | 以绵羊β-乳球蛋白基因(B—Lactoglobulin，β-LG)为转基因表达框架，将人G-CSF，(Human Granulocyte Colony Stimulating Factor，4G-CSF)基因与报告基因一增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescenct Protein，EGFP)基因作为双表达单元拼接到口β-LG基因的第一外显子处，并在G-GSF基因两侧引入同源重组位点loxP、fox2272，将打靶基因表达构件β-LG-hG-GSF-IRES-EGFP(总长9．3kb)分为两段进行构建，片段Ⅰ(长5．9kb)与片段Ⅱ(长5．6kb)两段重叠部分为2．2kb。向小鼠受精卵细胞质共注射构件片段Ⅰ、Ⅱ和NLS(核定位信号)3个基因片段。对仔鼠进行整合与表达的检测。PCR-Southem杂交检测结果表明，片段I的整合率为62．3％(86／138)，片段Ⅱ的整合率为54．3％(75／138)，片段Ⅰ、Ⅱ共整合(包括两片段分别整合和染色体外同源重组两种情况)的小鼠为62只，整合率为44．9％(62／138)，其中在双阳性转基因小鼠中发生染色体外同源重组的几率为80．6％(50／62)。RT-PCR-Southem检测了10只发生染色体外同源重组的转基因雌性小鼠，hG-GSF基因的表达率为90％(9／10)，EGFP基因的表达率为100％(10／10)，通过对其乳汁紫外吸收光谱的检测，EGFP基因的表达率为50％(5／10)。上述结果表明，染色体外同源重组结合细胞质注射技术研制转基因动物是简便实用的转基因途径。
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| 关 键 词： | 染色体外同源重组 核定位蛋白 转基因小鼠 β-乳球蛋白基因 EGFP G-GSF |
| 文章编号： | 0379-4172(2004)06-0572-06 |
Transgenic Mice Produced by Exchromosomal Homologous Recombination Combined with Cytoplasmic Injection |
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| GENG Yan-Yan. Transgenic Mice Produced by Exchromosomal Homologous Recombination Combined with Cytoplasmic Injection[J]. Journal of Genetics and Genomics, 2004, 31(6): 572-577 |
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| Authors: | GENG Yan-Yan |
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| Affiliation: | GENG Yan-Yan~ |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | exchromosomal homologous recombination (ECR) nuclear locating sequence transgenic mouse beta-lactoglobulin EGFP G-CSF |
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