| 基于核酶技术的人线粒体色氨酸tRNA的高效转录及其活性鉴定 |
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| 引用本文： | 巩菊芳,曹诣斌,陈祥龙,齐育平,杨小强,金晓玲.基于核酶技术的人线粒体色氨酸tRNA的高效转录及其活性鉴定[J].生物工程学报,2009,25(11):1732-1738. |
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| 作者姓名： | 巩菊芳 曹诣斌 陈祥龙 齐育平 杨小强 金晓玲 |
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| 作者单位： | 1. 浙江师范大学化学与生命科学学院,金华,321001
2. 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室,上海,200031
3. 中南林业科技大学,环境艺术设计学院,长沙,410004 |
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| 基金项目： | 浙江省自然科学基金项目(No.Y205353,Y2080644)资助~~ |
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| 摘 要： | 利用T7RNA聚合酶(T7 RNA polymerase,T7 RNAP)的体外转录方法因其简便、高效而在RNA制备中得到广泛应用,但该法由于T7RNAP的启动子跨越转录起始位点而会导致转录产物多出附加序列;如果去掉T7启动子的转录起始位点,则会严重降低T7RNAP的转录活性。本实验很好地消除了以上弊端,将T7RNAP的高效转录系统与核酶高度专一的自剪切技术相结合,成功构建了一种不影响转录效率的体外转录方法,而且转录后核酶能够在设计的特定位点进行自剪切并释放出目的RNA,得到了活性达113.6pmol/μg的人线粒体色氨酸tRNA(HmtRNATrp(UCA))。该方法转录效率高、重复性好,适合RNA的大量精确制备。
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| 关 键 词： | 体外转录 核酶 人线粒体色氨酸tRNA |
| 收稿时间： | 2009/7/27 0:00:00 |
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