含人β-内啡呔融合基因的腺病毒/腺相关杂合病毒载体的构建与鉴定 |
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作者姓名: | 徐学武 俞卫锋 王星华 李泉 董刚 吴飞翔 |
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作者单位: | 1. 第二军医大学东方肝胆外科医院麻醉科,上海,200438 2. 第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室,上海,200438 |
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摘 要: | 目的:构建含人β-内啡呔融合基因的腺病毒腺相关杂合病毒。方法:构建腺病毒穿梭质粒pDC312-DTREE,与骨架质粒共转染HEK293细胞,细胞内同源重组包装出腺病毒腺相关杂合病毒。PCR法鉴定病毒及TCID50法测定病毒滴度。杂合病毒感染NIH3T3细胞观察转基因的表达,ELISA法测定表达产物浓度。结果:穿梭质粒pDC312-DTREE经限制性核酸内切酶AatII及NotI酶切结果正确。PCR鉴定结果表明病毒DNA内有人β-内啡呔DNA序列,且无野生型病毒的污染,病毒滴度为1.29×1010PFUml。病毒感染细胞后第3d,细胞培养液内有高浓度的β-内啡呔。结论:成功构建了含人β-内啡呔融合基因的腺病毒腺相关杂合病毒,为进行下游相关研究奠定了基础。
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关 键 词: | β-内啡呔 腺病毒 腺相关病毒 杂合病毒 构建 鉴定 |
文章编号: | 1004-311X(2005)04-0006-03 |
收稿时间: | 2005-02-15 |
修稿时间: | 2005-05-10 |
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