HCV特异性反义RNA表达载体的构建及活性评价 |
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引用本文: | 王小红,王升启,管伟,毛秉智.HCV特异性反义RNA表达载体的构建及活性评价[J].生物工程学报,2001,17(2):179-182. |
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作者姓名: | 王小红 王升启 管伟 毛秉智 |
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作者单位: | 军事医学科学院放射医学科学院, |
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基金项目: | 国家“863”高技术研究项目(102-08-04-01)和军队九.五重点课题基金资助(962007). |
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摘 要: | 反义RNA是反义技术的一个重要领域,为探索丙型肝炎病毒治疗新途径及验证转基因细胞模型HepG2.9706的有效性,设计了一条互补于HCV 5′NCR及翻译起始区(39713核苷酸)的反义RNA序列,将其插入pGL3载体SV40启动子下游,构建了HCV特异性的反义RNA真核表达载体(pHCV-asR)。通过PCR扩增、酶切反应及序列分析进行了初步鉴定,并将其转染HepG2细胞,通过RTPCR方法检测其在细胞中的表达并将pHCV-asR转染转基因细胞模型HepG2.9706,评价其对HCV 5′NCR的抑制活性。结果表明,构建的反义RNA表达载体插入序列正确,并能在HepG2细胞中表达;pHCV-asR在HepG2.9706中对HCV 5′NCR调控荧光素酶基因表达具有特异性的剂量依赖性抑制活性,最高抑制率可达57%。
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关 键 词: | HCV,反义RNA,HepG2.9706,pHCVasR |
文章编号: | 1000-3061(2001)02-0179-04 |
修稿时间: | 2000年9月26日 |
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