| 重组人ZP3蛋白在大肠杆菌中的高效表达 |
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| 引用本文： | 叶志华,梁建庆.重组人ZP3蛋白在大肠杆菌中的高效表达[J].生物技术,2006,16(6):3-7. |
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| 作者姓名： | 叶志华 梁建庆 |
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| 作者单位： | 广东省微生物研究所,广东省菌种保藏与应用重点实验室,广东,广州,510070 |
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| 基金项目： | 广东省科技攻关项目资助(“重组人卵透明带-3蛋白的高效表达及其分离制备的研究”,2004B10401004) |
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| 摘 要： | 目的:用基因工程方法制备重组人ZP3蛋白。方法:以全长人ZP3 cDNA片段为模板,通过PCR扩增出编码人ZP3蛋白不同肽段的cDNA片段,然后将这些cDNA片段分别插入到表达载体pET-19b的NcoⅠ-BamHⅠ或NdeⅠ-BamHⅠ位点内,共构建成6种人ZP3蛋白非融合表达质粒(pEZP3-1~pEZP3-6)和3种人ZP3蛋白融合表达质粒(pEZP3-7~pEZP3-9)。将这9种表达质粒分别转化大肠杆菌Rosetta2(DE3)感受态细胞并选择出Apr转化子,将Apr转化子接种到NZCYM培养基中(含AP 100μg/mL),在35~37℃振荡培养到对数生长期,加入IPTG至1.0~1.5mmol/L浓度诱导培养3h,离心收集细胞进行SDS-PAGE电泳检测和Western Blot杂交分析。结果:这9种人ZP3蛋白表达质粒在大肠杆菌Rosetta2(DE3)中得到高效表达,目的蛋白占总细胞蛋白的10~25%,表达产物均以包涵体形式存在。结论:成功构建了重组人ZP3蛋白原核表达系统,为进一步研究和应用人ZP3蛋白打下了基础。
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| 关 键 词： | 人ZP3蛋白 表达 大肠杆菌 |
| 文章编号： | 1004-311X（2006）06-0003-05 |
| 收稿时间： | 2006-06-09 |
| 修稿时间： | 2006-09-26 |
High - level Expression of Recombinant Human ZP3 Protein in E. coli |
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| YE Zhi-hua,LIANG Jian-qing.High - level Expression of Recombinant Human ZP3 Protein in E. coli[J].Biotechnology,2006,16(6):3-7. |
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| Authors: | YE Zhi-hua LIANG Jian-qing |
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| Institution: | Guangdong lnstitue of Microbiology, Guangdong Provincial Laboratory of Microbial Culture Collection and Application, Guangzhou 510070, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | human ZP3 protein expression E coli |
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