猪生长激素基因在金鱼中的整合、表达与生物活性(英文)

自Ｐａｌｍｉｔｅｒ于１９８２年首次将大鼠生长激素基因导入小鼠受精卵，培育出“超级鼠”以来，转基因动物技术获得迅速发展。本文以低等脊锥动物为实验动物，探讨猪生长激素基因导入金鱼受精卵后的整合与表达、生物学效应及后代遗传等问题，为进一步研究外源基因在高等脊椎动物（包括猪）内整合与表达的调控机理提供方法上的参考。实验结果表明：采用显微注射方法，将羊金属硫蛋白基因启动子与猪生长激素基因重组的线型ＤＮＡ（Ｆｉｇ．１）片段导入金鱼受精卵中，获得成活实验鱼，经斑点（Ｆｉｇ．２），Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交（Ｆｉｇ．３），筛选ＰＧＨ阳性的转基因鱼作为亲本交配，分别得到Ｆ１代和Ｆ２代。经斑点、ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析（Ｆｉｇｓ．４，５＆６）及放射免疫检测（Ｔａｂ．１），表明外源基因在部分受体鱼中得到整合和表达，并能通过有性繁殖传递给后代，且仍具生长效应（Ｆｉｇ．７；Ｔａｂ．２）。本实验获得的转基因阳性金鱼数量有限，且只传了两代，似乎不足以说明转基因金鱼后代表观特征的遗传稳定，但转基因金鱼Ｆ１代中存在外源基因整合位点纯合的个体是可能的。这为建立转基因动物纯系奠定了基础。