摘 要: | 目的:研制基因工程嵌合肽(CP)抗原的科学意义和应用价值,除取决于CP构建物能否体现强免疫原性和光或无MHC遗传限制外,它还应能在生物系统中被高表达,对于后,我们作了多方面的探索,包括在系列hCG CPs(-1,-7,-10,和-11)的N端再接一段25聚肽的研究。方法:插入片段选自可高表达的猪卵透明带(pZP)-4蛋白的N端,在上述hCGCPs的衍生物(CP12,CP15-17)构建中,先合成它的编码序列正负链4个DNA片段,然后配对退火,再连接成一个大片段,由于其5'端为EcoRI(E)粘性末端,3'端接了母体CPs 5'端ATG后至B HI(B)粘性末端的17bp序列,故此合成片段被直接经E和B双酶切构建pBV221/CP系列重组质粒,并分别经DNA测序验证,结果:在SDS-PAGE分析中,新构建的CP衍生物在宿主菌中的表达量均比母体CPs有明显提高,且的特异表达都为单抗OT3A的蛋白印迹试验所证实。另外,用兔抗pZP多抗的检测显示阴性结果,表明所选用的pZP-4肽段内无B细胞表位存在。意义:本工作不仅为今后其他CP分子设计和高表达研究结累了经验,也扩展了可供筛选的hCG CP避孕和/或肿瘤治疗性疫苗原系列。
|