检测粪便中GGⅡ型诺如病毒Real-time RT-PCR方法的建立 |
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作者姓名: | 司红丽 王健伟 徐樨巍 王建华 屈建国 洪涛 |
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作者单位: | 西北农林科技大学,动物科技学院,陕西,杨陵,712100;中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所,北京,100052;中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所,北京,100052;首都医科大学,附属北京儿童医院,北京,100045;西北农林科技大学,动物科技学院,陕西,杨陵,712100 |
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基金项目: | 国家“十五”科技攻关计划资助项目(项目编号:2003BA712A03-04,2001BA804A22) |
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摘 要: | 诺如病毒是世界急性胃肠炎的重要病原之一。为加强其控制,通过序列比对设计出针对GGⅡ型诺如病毒保守序列的特异性引物与探针,建立了TaqMan Real-time RT-PCR方法。结果显示,此方法对诺如病毒核酸检测高度特异,与轮状病毒、腺病毒、甲型肝炎病毒等无交叉反应,最低检出限可达102拷贝,线性范围为109~102拷贝,标准曲线的相关系数为-1.00。针对标准品质粒检测的批内实验变异系数为0.28%~1.63%(n=6)、批间实验为0.28%~1.05%(n=3),对同一样品分6次进行RNA提取和逆转录,其变异系数为3.88%。对212份临床腹泻标本分别用常规RT-PCR和本文建立的TaqMan Real-time PCR进行检测,发现后者检出率略高于前者。这些结果提示此研究建立的诺如病毒的TaqMan Real-time RT-PCR检测方法可用于临床腹泻粪便标本的检测。
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关 键 词: | Real-time RT-PCR 人类杯状病毒 诺如病毒 检测 |
文章编号: | 1000-8721(2006)03-0166-06 |
收稿时间: | 2005-11-24 |
修稿时间: | 2005-11-242006-03-01 |
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