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人晶体膜内蛋白MP19基因(LIM2)启动子上一个晶体特异顺式元件的鉴定
引用本文:徐恒 张叔人 桑建利 齐若梅 Robert L Church.人晶体膜内蛋白MP19基因(LIM2)启动子上一个晶体特异顺式元件的鉴定[J].生物工程学报,2004,20(4).
作者姓名:徐恒  张叔人  桑建利  齐若梅  Robert  L  Church
作者单位:1. 中国医学院中国协和医科大学,北京,100730
2. 中国医学院中国协和医科大学肿瘤所免疫室,北京,100021
3. 北京师范大学生命科学院细胞所,北京,100875
4. 卫生部老年医学重点实验室,北京,100730
5. 美国Emory大学医学院眼科研究中心,美国乔治亚州亚特兰大市
基金项目:National Institutes of Health Grants,the Knights Templar Educational Foundation of Georgia to RLC,Research to Prevent Blindness
摘    要:使用重叠和变异的寡核苷酸作为探针,凝胶迁移分析和竞争实验分析了LIM2转录起始位点上游-47至-32的区域,与其高度亲和结合的一个蛋白复合体看来仅仅结合到这个DNA双链区域的“敏感”位点。这个位点的序列由4个G核苷,接着7个其他核苷酸(AACCTAA)及连着另外4个G核苷组成,即GGGGAACCTAAGGGG; 我们称其为Hsu元件。使用含有这个元件或相应的变异元件所构建的LIM2基因启动子CAT质粒的活性分析表明Hsu元件是位于LIM2基因启动子之内,它是LIM2基因表达所必须的。结合到Hsu元件的反式因子存于晶体发育期间,看来是晶体特异性的。由于LIM2基因启动子并不包含一个经典的TATA盒,这个Hsu元件可能充当RNA复制酶复合体结合的位点。

关 键 词:晶体纤维膜,  MP19    LIM2基因,  启动子,  TATA盒,  顺式元件

Identification of a Lens-specific cis-acting Element within the Basal Promoter of the Human Lens Intrinsic Membrane Protein MP19 Gene(LIM2)
Abstract:Using overlapping and mutant oligonucleotides as probes, gel mobility assays and competition experiments identified a sequence from -47 to -32 bp upstream of the LIM2 CAP site, which a lens protein complex bound with high affinity which appeared to bind only to the "sense" strand of the double-stranded DNA molecule. This sequence consisted of a string of four guanine residues followed by seven other nucleotides (AACCTAA) and followed by another four guanines, i.e. GGGGAACCTAAGGGG, called the Hsu element. Promoter-CAT constructs containing this sequence or mutations of the sequence indicated that the Hsu element is located within the basal promoter, and is essential for expression of the LIM2 gene. The trans factors binding to the Hsu element are present throughout development, and appear to be lens-specific. Since the LIM2 gene promoter does not contain a classic TATA box, the Hsu element may serve as the site for binding the RNA polymerase complex.
Keywords:lens fiber membrane  MP19  LIM2 gene  promoter  TATA box  cis-acting element
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