一种新型ω-转氨酶的工业适应性选择 |
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引用本文: | 王继国,谢有余,王华磊,魏东芝.一种新型ω-转氨酶的工业适应性选择[J].生物工程学报,2020,36(9):1929-1938. |
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作者姓名: | 王继国 谢有余 王华磊 魏东芝 |
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作者单位: | 华东理工大学 生物工程学院,上海 200237 |
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基金项目: | 国家自然科学基金 (No. 21776084/B060804) 资助。 |
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摘 要: | 尽管ω-转氨酶被认为是手性胺合成中极具工业潜力的生物催化剂,但是由于受限于酶的热不稳定及不利的反应平衡,能直接适用于工业的野生酶极少。为了发现工业适应潜力的新型ω-转氨酶,文中设计了包括底物、序列、克隆、酶活、转化率及酶学的工业适应性选择流程,并对各筛选步骤中存在的问题进行了研究,进而从土壤宏基因组中筛选出了一种来源于柄杆菌属的新型ω-转氨酶ATA-W12,以异丙胺为供体在1 mL反应体系中转化了85.84% 1-Boc-3-吡咯烷酮 (20 mmol/L) 和67.42% 1-Boc-3-哌啶酮 (20 mmol/L)。酶学筛选发现,ATA-W12在40 ℃孵育168 h活力维持不变;优选反应条件为pH 8.5、40 ℃;这些特征利于工业用理想氨基供体异丙胺的使用。笔者已采用ATA-W12实现了100 g/L光学纯(S)-(+)-1-Boc-3-氨基哌啶的50 mL实验室规模制备,为进一步工业化生产打下基础。
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关 键 词: | 手性胺合成,ω-转氨酶,异丙胺,适应性选择 |
收稿时间: | 2020/1/16 0:00:00 |
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