含人纤溶酶原K5基因的腺病毒载体制备和功能研究

应用PCR将人纤溶酶原信号肽序列引入K5 cDNA基因，与真核表达载体pcDNA3重组，形成重组质粒pcDNA3K5，与穿梭质粒pShuttle 重组得pShuttleK5，经与腺病毒DNA重组，PCR鉴定正确，即为pAdK5。脂质体法将其转染293细胞后，制备细胞裂解液；噬斑分析法测定病毒滴度为5×10⁸ pfu/mL。将病毒以不同的感染系数(MOI)感染人脐静脉内皮细胞株ECV304和人乳腺癌细胞株MDA-MB-231，MTT法检测两者的增殖情况：ECV304细胞增殖受抑制，而MDA-MB-231细胞增殖未受明显影响。将感染病毒的ECV304细胞接种于ECMatrix^TM胶，显示内皮细胞分化和毛细血管管腔形成受抑制。表明所构建的含人纤溶酶原K5基因的重组复制缺陷型腺病毒具有抑制ECV304细胞增殖、分化和管腔形成的作用而对MDA-MB-231细胞的生长则无影响。