| 一种几丁质酶基因的克隆表达及酶解产物分析 |
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| 引用本文： | 肖景惠,李美玉,孙淼,王晓辉.一种几丁质酶基因的克隆表达及酶解产物分析[J].微生物学通报,2016,43(10):2179-2186. |
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| 作者姓名： | 肖景惠 李美玉 孙淼 王晓辉 |
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| 作者单位： | 大连大学生命科学与技术学院 辽宁 大连 116622,大连大学生命科学与技术学院 辽宁 大连 116622,大连大学生命科学与技术学院 辽宁 大连 116622,大连大学生命科学与技术学院 辽宁 大连 116622 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(No. 31500039)；辽宁省大学生创新创业训练计划项目(No. 201511258003) |
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| 摘 要： | 【目的】克隆耐冷菌假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.DL-6)的几丁质酶基因并进行原核表达,纯化重组蛋白并研究其酶解产物。【方法】采用PCR扩增法从Pseudoalteromonas sp.DL-6中克隆几丁质酶基因(chi A),连接到表达载体p ET28a,导入Escherichia coli BL21(DE3)进行诱导表达。SDS-PAGE检测几丁质酶Chi A的分子量与纯度,4-甲基伞形酮荧光底物4MU-(Glc NAc)2测定酶活,电喷雾质谱(ESI-MS)检测酶解产物。【结果】chi A基因(Gen Bank登录号KF234015)在大肠杆菌中高效表达,Ni-NTA亲和层析柱纯化几丁质酶Chi A的总活力可达168.68 U。ESI-MS检测结果表明重组蛋白酶解1%胶体几丁质的产物为几丁寡糖。【结论】利用内切几丁质酶Chi A水解几丁质生产几丁寡糖,为其在食品、医药和农业等领域的潜在应用提供有利参考。
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| 关 键 词： | 几丁质酶，基因克隆，原核表达，纯化，几丁寡糖 |
Cloning and Expression of a Novel Chitinase Gene and the Analysis of Its Hydrolysis Products |
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| XIAO Jing-Hui,LI Mei-Yu,SUN Miao and WANG Xiao-Hui.Cloning and Expression of a Novel Chitinase Gene and the Analysis of Its Hydrolysis Products[J].Microbiology,2016,43(10):2179-2186. |
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| Authors: | XIAO Jing-Hui LI Mei-Yu SUN Miao and WANG Xiao-Hui |
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| Institution: | College of Life Science and Technology, Dalian University, Dalian, Liaoning 116622, China,College of Life Science and Technology, Dalian University, Dalian, Liaoning 116622, China,College of Life Science and Technology, Dalian University, Dalian, Liaoning 116622, China and College of Life Science and Technology, Dalian University, Dalian, Liaoning 116622, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Chitinase Gene cloning Prokaryotic expression Purification Chitooligosaccharides |
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