| 人工锌指核酸酶突变EGFP基因的功能分析 |
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| 作者姓名： | 袁玉国 于宝利 宋绍征 周峰 张利清 顾迎迎 禹明慧 成勇 |
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| 作者单位： | 扬州大学兽医学院 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏 扬州 225009;扬州大学兽医学院 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏 扬州 225009;扬州大学兽医学院 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏 扬州 225009;扬州大学兽医学院 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏 扬州 225009;扬州大学兽医学院 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏 扬州 225009;扬州大学兽医学院 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏 扬州 225009;扬州大学兽医学院 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏 扬州 225009;扬州大学兽医学院 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏 扬州 225009 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No. 31101871),国家转基因生物新品种培育重大专项 (Nos. 2011ZX08008-004,2009ZX08008-009B),江苏高校优势学科建设工程资助。 |
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| 摘 要： | 锌指核酸酶技术在基因定点修饰中具有效率高和特异性好等特点,并成功应用于数十种生物。目前,该技术是否能应用羊上尚未报道。为了敲除转基因山羊标记基因 (EGFP),构建了一对针对EGFP外显子上的锌指核酸酶表达载体,将其电转染至转EGFP基因胎儿成纤维细胞中,研究了锌指核酸酶突变EGFP基因的效率和方式,利用基因显微注射单细胞获得获得的转基因 (EGFP) 细胞系作为锌指核酸酶的靶细胞。结果显示,通过锌指核酸酶的突变作用,转染后的细胞发绿色荧光比例下降,测序结果显示在EGFP外显子中插入1个碱基G,导致编码EGFP基因的阅读框改变,从而起到基因突变的作用。结果表明,文中构建的锌指核酸酶对EGFP基因有突变作用,可以为以后获得无标记基因供核细胞进行体细胞核移植生产克隆羊奠定基础。
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| 关 键 词： | 人工锌指核酸酶 核移植 EGFP 基因打靶 细胞显微注射 山羊体细胞 |
| 收稿时间： | 2013-01-17 |
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