| 应用Ad Easy载体系统构建人β2-AR基因重组腺病毒 |
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| 引用本文： | 宫海滨,魏翠,张清林,吕茜.应用Ad Easy载体系统构建人β2-AR基因重组腺病毒[J].现代生物医学进展,2009,9(4). |
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| 作者姓名： | 宫海滨 魏翠 张清林 吕茜 |
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| 作者单位： | 徐州市心血管病研究所,徐州市中心医院,江苏,徐州,221009 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金,江苏省自然科学基金,江苏省卫生厅重大项目,江苏省医学重点人才资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:利用Ad easy腺病毒表达系统构建含人β2-肾上腺素能受体(β2-AR)基因重组腺病毒,并在HEK293细胞中扩增制备重组腺病毒.方法:将β2-AR全长cDNA插入到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,构建pAdTrackCMV-β2AR重组质粒,经PmeI酶切线性化后经电击法转入含Ad easy质粒的电感受态菌BJ5183进行重组.挑选同源重组质粒,Pac I酶切线性化转染HEK293细胞包装成重组腺病毒颗粒.将重组病毒和SD大鼠心肌细胞共培养,western-blot检测β2-AR的表达.结果:琼脂糖凝胶电泳显示在1242bp处有特异性条带后被克隆至腺病毒穿梭质粒.重组穿梭载体经Hind Ⅲ和Xba Ⅰ限制性酶切可以得到目的条带并经测序证实.电击法转化BJ5183所得候选重组子经PacⅠ酶切后得到30Kb腺病毒基因组片段和4.5Kb氨苄抗性片段,证实获得同源重组质粒.转染293细胞可以看到绿色荧光蛋白,以MOI100转染SD大鼠心肌细胞发现携带β2-AR的腺病毒可以在心肌细胞中过表达.结论:利用新型腺病毒载体在短时间内成功构建了携带有人β2-AR基因的腺病毒,为进一步研究人β2-AR基因治疗奠定了基础.
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| 关 键 词： | Ad Easy腺病毒 人β2-肾上腺素能受体 大鼠 心肌细胞 |
Construction and Expression of the Recombinant Adenovirus Carrying Human β2-Adrenergic Receptor |
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| GONG Hai-bing,WEI Cui,ZHANG Qing-lin,LV Qian.Construction and Expression of the Recombinant Adenovirus Carrying Human β2-Adrenergic Receptor[J].Progress in Modern Biomedicine,2009,9(4). |
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| Authors: | GONG Hai-bing WEI Cui ZHANG Qing-lin LV Qian |
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