膨大弯颈霉中与Bmt生物合成相关的PKS基因功能研究

环孢霉素A是一种主要由膨大弯颈霉Tolypocladium inflatum产生的环肽类次级代谢产物，临床上被广泛用作免疫抑制剂，其合成需要特殊底物(4R)-4-(E)-2-butenyl]-4-methyl-L-threonine (Bmt)，但目前相关Bmt的研究很少。基因敲除实验证实Bmt的生物合成需要一个聚酮合酶(polyketosynthase,PKS)基因(simG)参与，并推测其功能为合成Bmt的前体化合物羧酸分子3(R)-hydroxyl-4(R)-methyl-6(E)-octenoicacid(B1)。本研究通过在同为虫生真菌的球孢白僵菌Beauveriabassiana中异源表达simG，以证明该基因的功能。通过克隆获得了较大基因simG，利用根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导方法将该基因转化到球孢白僵菌中，通过基因检测和半定量RT-PCR筛选出目标基因表达量高的菌株，获得4株simG高表达菌株。将其发酵培养后，利用LC-MS检测发酵产物，发现在simG高表达菌株中存在与B1分子量相同的产物峰。本研究进一步证明了simG负责化合物B...